La mutagenesi sito specifica e' una tecnica usata per:

• creare specifiche alterazioni in un gene
• studiare la relazione tra struttura delle proteine e la sua funzione
• modificare o riparare costrutti di DNA
• alterare siti di restrizione, inserire o eliminare elementi di un vettore ( per esempio elementi tag, o scambio di promotori)

Possiamo introdurre ogni tipo di mutazione singola o multipla* (sostituzione, inserzione o delezione) in plasmidi fino a 15kb. Per plasmidi piu' grandi o templati diffcili contattare il laboratorio laboratori@biofabresearch.it

IL SERVIZIO COMPRENDE:

• Sequenziamento for e rev del campione per confermare il DNA prima della mutagenesi (oligo forniti dal cliente**)
• Disegno e sintesi dell'oligo mutagenizzante
• amplificazione del DNA
• trasformazione, cultura cellulare e purificazione di 8 colonie random
• Sequenziamento di 8 colonie random per confermare la mutazione
• 4/5 giorni per singola mutazione
• invio del contig delle sequenze for e rev piu' i relativi singoli elettroferogrammi
• invio di 1/4ug di DNA plasmidico mutato purificato

A richiesta e' possibile anche sequenziare l'intero inserto con sintesi dei relativi oligo che verranno conservati nella banca oligo personale.
A richiesta e' possibile ricevere una preparazione maggiore di DNA plasmidico purificato (midi o maxi)

MATERIALE DA SPEDIRE IN LABORATORIO:
-2 ug di plasmide purificato contenente il DNA che deve essere mutato. proveniente da un ceppo di e.coli dam+ .i plasmidi isolati da ceppi dam- non sono idonei (per es. jm110 e scs110)
-Mappa del plasmide con indicazione della resistenza all'antibiotico e sequenza del DNA target
-istruzioni sulla mutagenesi: lista e localizzazione delle basi per inserzione, delezione e sostituzione