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sequenziamento  e genotyping
 

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Purificazione PCR per il sequenziamento
 
La purificazione dei prodotti di PCR viene effettuata in high throughput utilizzando kit commerciali a membrana di silice. E’ importante che il prodotto di PCR abbia una banda sola.
 
Materiale da inviare

1) 50 ul della reazione di PCR in provette da 0,2 ml

2) Oligo concentrati 2 pmoli/µl (2 µM). Il volume di oligo deve essere proporzionale alla quantità di reazioni (volume= 6µl X n.campioni da sequenziare)e deve essere consegnato in provette da 0,2 ml

3) Form compilato come da indicazioni Bio-Fab:
nominare i campioni con cognome e numero progressivo (a partire da 01) e poi aggiungere altre informazioni come nome del templato e dell’oligo

Nel caso in cui si debba sequenziare un campione con più oligo si deve compilare il form mettendo prima tutti i campioni da sequenziare con il “primo oligo” e, proseguendo la numerazione progressiva, aggiungere i nomi dei campioni da sequenziare anche con altri oligo riportando tra parentesi il riferimento al campione originario, e quindi al numero della provetta.

Indicare inoltre la lunghezza degli amplificati.

4) La foto degli amplificati, 5 ul delle PCR, corsi su gel d’agarosio è fortemente consigliata. Devono essere indicate le dimensioni della banda e quella del marker di riferimento.

 
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